光老化動物模型構(gòu)建服務(wù)

一、光老化背景簡介

皮膚衰老是一個由基因和外界環(huán)境因素等共同作用下的結(jié)果。皮膚老化根據(jù)影響因素的不同分為內(nèi)源性老化和外源性老化。內(nèi)源性老化是指基因?qū)用娴碾S著時間推移產(chǎn)生的自然老化。外源性老化是指環(huán)境因素如紫外線輻射、吸煙、毒害化學品等影響下產(chǎn)生的皮膚損害積累，其中紫外線輻射是導致外源性老化最主要的因素。因此，外源性老化又稱為皮膚光老化。建立有效的皮膚光老化動物模型，是研究及防治人體皮膚光老化的基礎(chǔ)。

二、光老化模型簡介

皮膚光老化動物模型的設(shè)計思路主要是模擬真實的紫外照射情況。日光中的紫外線（ultraviolet，UV）分為3個波段：短波紫外線（UVC，190～290 nm）、中波紫外線（UVB，290～320 nm）和長波紫外線（UVA，320～400 nm）。其中UVC幾乎全被臭氧層吸收，到達地面的主要為 UVA 和 UVB；UVA 的活性很低，而UVB活性是UVA活性的1000倍。UVB 主要導致皮膚表皮層和真皮淺層的損傷，可引起皮膚松弛、干燥、粗糙、皺紋加深、色素沉著等，甚至可以導致皮膚癌。因此皮膚光老化模型一般使用采用窄譜UVB（311～312 nm）作為紫外照射光源。

三、光老化動物模型構(gòu)建服務(wù)的方法

1. 實驗動物

10-12周雌性裸鼠

2. 實驗設(shè)備

311nm的UVB紫外燈管（安裝在自制紫外照射箱中，紫外燈距離小鼠背部約30cm）。紫外照度計用于監(jiān)測 輻照度。

3.實驗流程

造模時間共計八周，間隔一天進行紫外照射，流程如下表：

4.光老化模型鑒定

4.1 一般狀態(tài)及皮膚宏觀評價

隔日觀察裸鼠的一般狀態(tài)，如食量、精神狀態(tài)等。同時，對裸鼠背部皮膚與光老化相關(guān)的宏觀特征（如皺紋、增厚、粗糙、彈性、紅斑等）進行觀察評價，并對其背部皮膚進行拍照記錄。根據(jù)下表所示皮膚光老化評分標準對其背部皮膚進行宏觀評分。

4.2 皮膚彈性測試

根據(jù) Tsukahara 等人建立的提皮測試方法對裸鼠皮膚彈性進行評價，每四周一次，共檢查兩次。用拇指和食指將裸鼠背部皮膚沿正中線靠后的位置輕輕提起（以裸鼠四肢不懸空為度）后立即放開，并記錄皮膚恢復至初始狀態(tài)的時間[8]。

4.3 皮膚組織學檢測

4.3.1 HE 檢測：表皮組織結(jié)構(gòu)觀察及厚度測量

皮膚組織經(jīng) HE 染色后，光學顯微鏡下觀察皮膚組織角質(zhì)層、表皮層和真皮層結(jié)構(gòu)及細胞層數(shù)；觀察毛囊、汗腺、皮脂腺等附屬器官的形態(tài)；以及觀察是否有出血現(xiàn)象及炎性細胞浸潤等。

4.3.2 Masson 檢測：膠原纖維的分布及形態(tài)觀察

皮膚組織經(jīng) Masson 染色后，光學顯微鏡下觀察顯示膠原纖維呈藍色，胞質(zhì)、肌纖維和紅細胞紅色，胞核藍褐色。觀察膠原纖維的含量、形態(tài)及分布的變化情況。

四、小結(jié)：

選用311nm的UVB紫外線燈照射8周可以成功建立小鼠皮膚光老化模型。模型組小鼠的皮膚肉眼可見變紅、松弛、粗糙、色素沉著、皺紋增加等； 病理觀察可發(fā)現(xiàn)表皮增厚，膠原纖維含量減少， 排列紊亂等現(xiàn)象。

五、參考文獻

[1]GARRE A, NARDA M, VALDERAS-MARTINEZ P, et al. Antiaging effects of a novel facial serum containing L-Ascorbic acid,proteoglycans,and proteoglycanstimulating tripeptide:ex vivo skin explant studies andin vivo clinical studies in women[J]. Clin Cosmet Investig Dermatol, 2018, 11:253-263.

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[4] OLIVEIRA M M, RATTI B A, DAR R G, et al. Dihydrocaffeic acid prevents UVB-induced oxidative stress leading to the inhibition of apoptosis and MMP-1 expression via p38 signaling pathway[J]. Oxid Med Cell Longev, 2019, 2019:2419096.

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[6]王秀芬. 廣藿香酮,亞硫酸氫鈉cxl內(nèi)酯抗小鼠皮膚光老化作用[D]. 廣州中醫(yī)藥大學, 2016.